蛋白純化系統(tǒng)、超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、雙光束核酸蛋白檢測儀、紫外分析儀、紫外檢測儀、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等為**的十幾個(gè)產(chǎn)品系列
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基因脈沖導(dǎo)入技術(shù)及應(yīng)用
日期：2024-11-21 23:58
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摘要：
生命科學(xué)儀器2005第3卷/第5期
孫云1,2，蘇明皓2，袁其平1，童崢嶸2，徐寶強(qiáng)2
（1.中民航學(xué)院,天津300300；2.天津理工大學(xué)光電信息與電子工程系,天津300191）
摘要 本文先介紹了細(xì)胞電穿孔的基本原理和天津理工大學(xué)自行研制的 基因脈沖導(dǎo)入儀，重點(diǎn)介紹了細(xì)胞電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、**、酵母上的應(yīng)用及電穿孔技術(shù)的些特殊應(yīng)用?；蛎}沖導(dǎo)入技術(shù)應(yīng)用前景十分廣泛。
關(guān)鍵詞基因脈沖導(dǎo)入，細(xì)胞電穿孔，膜電位
1細(xì)胞電穿孔的基本原理
細(xì)胞電穿孔是種新型生物物理新技術(shù)，它可使細(xì)胞可逆穿孔，從而導(dǎo)入外源RNA、DNA蛋白分子和各種小分子，產(chǎn)生具有新的生物性狀的轉(zhuǎn)化細(xì)胞株。該技術(shù)具有效率、低毒性、普適性和可控性的特點(diǎn)，在細(xì)胞工程和基因工程等方面具有廣泛應(yīng)用。
設(shè)細(xì)胞為球形，懸浮在溶液里并處于電場中。電場誘導(dǎo)的膜電位可由下式表示：
V=1.5αEcosθ
（1）式中α是細(xì)胞的半徑，E是外加電場強(qiáng)度，θ是經(jīng)過細(xì)胞膜任意點(diǎn)的徑向與電場方向之間的夾角。對(duì)于細(xì)胞的兩個(gè)點(diǎn)θ=0°或θ=180°，外加電場誘導(dǎo)的膜電位可進(jìn)步簡化為：Vdp=1.5αE （2）
隨著外加電場強(qiáng)度的增大，在細(xì)胞膜上誘導(dǎo)的膜電位也隨之增大。當(dāng)增大到定程度，細(xì)胞膜將出現(xiàn)電穿孔現(xiàn)象。此時(shí)的誘導(dǎo)膜電位Vcr叫臨界膜電位，Ecr叫做臨界外加電場。般認(rèn)為，外加場強(qiáng)為1～10KV/cm、電脈沖的持續(xù)時(shí)間在1μs～10ms時(shí)細(xì)胞膜會(huì)出現(xiàn)微孔。
公式（1）是細(xì)胞電穿孔的理論基礎(chǔ)，又是實(shí)際應(yīng)用的依據(jù)。但是實(shí)際情況是非常復(fù)雜的。例如，所有細(xì)胞都不是理想的球形，不同細(xì)胞形態(tài)各異、大小不同，就是同種細(xì)胞的大小、形狀也有區(qū)別；不同細(xì)胞膜組分有所不同，不同的培養(yǎng)條件以及細(xì)胞懸浮液成分不同造成生理?xiàng)l件不同等，對(duì)電穿孔都有不同程度的影響。因此公式不能給出準(zhǔn)確值，只能給出參考值，應(yīng)用中的實(shí)際電場強(qiáng)度仍需由實(shí)驗(yàn)來確定。
2導(dǎo)入技術(shù)
2.1導(dǎo)入技術(shù)的介紹
基因脈沖導(dǎo)入儀的主要功能是產(chǎn)生個(gè)電壓、大電流指數(shù)規(guī)律的尖脈沖。其主要組成包括壓脈沖產(chǎn)生器、微機(jī)控制板和電小池。
無論在阻或低阻（例如含鹽或蔗糖緩沖液）情況下都可以正常工作，可用于植物、動(dòng)物和各種微生物的各類細(xì)胞電穿孔，并能得到很的轉(zhuǎn)化率。該儀器用電擊法和傳統(tǒng)法相比簡單易行，省時(shí)間，效率，達(dá)到外同類產(chǎn)品的致效果。
根據(jù)客戶要求在原有產(chǎn)品基礎(chǔ)上我們又做了改進(jìn)，研制出LN-201、301系列產(chǎn)品。LN-301系統(tǒng)框圖如圖2所示。該儀器采用點(diǎn)陣式LCD顯示，能夠同時(shí)顯示多個(gè)信息，可做到漢字、字符同屏，便于用戶的操作和使用。系統(tǒng)可單脈沖和多脈沖兩種功能，便于用戶的選擇使用。組合電容由0.5、1、2、4、8、10μF的6個(gè)電容組合而成，可根據(jù)用戶的需要自由地組合。為了避免壓放電對(duì)單片機(jī)的干擾，采用了數(shù)字地和模擬地各自獨(dú)立的方式，使該儀器的穩(wěn)定性、可靠性得到較大的提。
與此配套的放電小池有1mm、2mm、4mm三種不同規(guī)格的放電小池。其中2mm、4mm小池的電有粘貼型的，1mm、2mm小池電有采用工字鋁注塑型的。
2.2電改進(jìn)
在原有各種電解小池的基礎(chǔ)上，為了更好的滿足客戶在基因**和臨床醫(yī)學(xué)方面的要求，我們又提出針狀電代替放電小池的方案，研制出各種放電電如用于動(dòng)物原地**注入（**增敏）和轉(zhuǎn)基因的針狀電（平行和梅花形）。四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)定強(qiáng)度的瞬態(tài)電磁脈沖作用于細(xì)胞體時(shí)，在細(xì)胞膜上將形成瞬時(shí)微孔，促進(jìn)**等大分子進(jìn)入細(xì)胞液。利用電穿孔結(jié)合******在昆明小鼠上接種和生長的S-180肉瘤，結(jié)果證明，這種方法可以明顯的抑制腫瘤細(xì)胞的生長。中醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形醫(yī)院，用針狀和平板的組合電，實(shí)驗(yàn)進(jìn)展很順利，取得了很好的效果。
3技術(shù)應(yīng)用
3.1電穿孔誘導(dǎo)基因的應(yīng)用
（1）電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在動(dòng)物細(xì)胞上的應(yīng)用利用電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)化動(dòng)物細(xì)胞雜種已成為許多實(shí)驗(yàn)室種有效的常規(guī)手段。電穿孔轉(zhuǎn)化率比傳統(tǒng)方法要數(shù)倍至上千倍。對(duì)貼壁生長的細(xì)胞，可以在單層培養(yǎng)物上進(jìn)行原位基因電轉(zhuǎn)移，不僅操作簡便，且轉(zhuǎn)移效率較[1]。動(dòng)物細(xì)胞電轉(zhuǎn)移不僅廣泛應(yīng)用于各種轉(zhuǎn)化細(xì)胞株，而且為遺傳病的基因**了良好的前景。
（2）電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在植物細(xì)胞上的應(yīng)用
它可以效地把外源DNA或RNA攝取到受體細(xì)胞，建立起轉(zhuǎn)化新株。例如將質(zhì)粒pCMC1020導(dǎo)入大豆原生質(zhì)中，已選擇出轉(zhuǎn)化愈傷組織，并生長出根[2]。
又將pD23和pMP1質(zhì)粒導(dǎo)入玉米原生質(zhì)中經(jīng)選擇培養(yǎng)已獲得轉(zhuǎn)化植株[3][4]。植物電穿孔可以獲得耐寒、耐旱、抗蟲、抗病毒等良品種。
（3）電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在**上的應(yīng)用[5]
**電穿孔基因轉(zhuǎn)移應(yīng)用研究近幾年來有了很大的發(fā)展，目前已有100多種**能成功地進(jìn)行基因電轉(zhuǎn)移。
天津醫(yī)科大學(xué)第附屬醫(yī)院將質(zhì)粒D N A和噬菌體DNA成功地轉(zhuǎn)化或?qū)氪竽c桿菌。該電場單次電壓脈沖范圍1.0 k V/2.5 k V（初電場強(qiáng)度2.8kV/cm～16kV/cm）、電容范圍為5～20μF，用質(zhì)粒p U C 1 8和受體菌株D H 5α，獲得轉(zhuǎn)化率為109～1010/μgDNA。
（4）電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在酵母上的應(yīng)用
酵母細(xì)胞電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移，如能把有關(guān)的目的基因轉(zhuǎn)移到細(xì)胞而得到表達(dá)，并能篩選出所需要的菌株，則對(duì)制藥業(yè)、釀造業(yè)和輕工業(yè)起到巨大推動(dòng)作用。
復(fù)旦大學(xué)生物化學(xué)系成功地進(jìn)行了青島海葵強(qiáng)心多肽在枯草桿菌和畢氏膠木中的分泌表達(dá)研究。
3.2電穿孔技術(shù)的特殊應(yīng)用
（1）電插入法將蛋白分子
插入細(xì)胞膜當(dāng)外加電場大于或等于臨界值時(shí)，在細(xì)胞膜上形成親水的孔洞，貫通于細(xì)胞內(nèi)外。而當(dāng)外加電場稍小于臨界值，但可將外源蛋白質(zhì)插入細(xì)胞質(zhì)膜，而不造成明顯的損傷。這種新穎的方法叫電插入法。例如將CD4受體插入紅細(xì)胞膜上，不僅可以延長受體的循環(huán)生活期，而且了種**艾滋病的方法[6]。
（2）將蛋白分子導(dǎo)入細(xì)胞
在條件下，電穿孔可使細(xì)胞損傷小，而又使細(xì)胞有效地通透，將內(nèi)切酶抗體等導(dǎo)入細(xì)胞。例如將腫瘤天門冬酰胺合成酶的單克隆抗體導(dǎo)入SHU**細(xì)胞和人成纖維細(xì)胞HT-5K，細(xì)胞成活率達(dá)80%～90%，而且90%的活細(xì)胞結(jié)合了抗體[7][8]。
（3）建立基因庫
電穿孔技術(shù)現(xiàn)已公認(rèn)是在原核細(xì)胞中進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移的有效的手段。對(duì)些好的菌株，其轉(zhuǎn)化率達(dá)1010/μgDNA，從而僅用少量DNA即可構(gòu)建綜合的基因庫。Dower等利用電穿孔方法已經(jīng)開發(fā)構(gòu)建大于109個(gè)獨(dú)立重組的質(zhì)粒庫[9]。
（4）在原位研究酶的活性
例如海膽卵在受精過程中，其生理活性增強(qiáng)，而酶是影響新陳代謝的因素，研究酶調(diào)節(jié)機(jī)制是令人感興趣的問題，電穿孔對(duì)細(xì)胞完整的干擾小，可以把帶標(biāo)記的底物導(dǎo)入細(xì)胞，進(jìn)行酶活性的研究[10]。
（5）基因靶定向
在通常情況下，導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的DNA在細(xì)胞內(nèi)基因組由非同源重組整合到非特定位置上。導(dǎo)入的DNA也可以偶然地由同源重組直接整合到特定位置。這種同源重組稱為基因靶定向。基因轉(zhuǎn)移效率越，同源重組體就越多。而電穿孔方法了個(gè)快速、效的將外源DNA導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法，使之能很容易的產(chǎn)生大量的細(xì)胞轉(zhuǎn)化體，成為基因靶定向中誘導(dǎo)DNA進(jìn)入細(xì)胞的個(gè)值得推薦的方法。
參考文獻(xiàn)
[1]Raptis,L.,andFirth,K.L.,1990DNACellbiol.9:615-621
[2]Christon,P.,et al.,1987,PNAS USA.84:3962-3966
[3]Rhodes.C.A.,etal.,1988Science240:204-207
[4]Allen,S.P.andBlaschek,H.P.,1990,FEMSMicrobriol.Lett.70:217-220
[5]宋詩鐸、張同海、祁偉、趙為誠、徐寶強(qiáng)、劉建民應(yīng)用電激法在大腸桿菌中導(dǎo)入外源性DNA生物工程學(xué)報(bào)1993，9（3）：237-240
[6]Zeira,M.,etal.,1991,proc.Natl.Acad.Sci,USA.88:4409-4413
[7]Chakrabarti,R.,1989,J.Biol.Chem.264:15494-15500
[8]BerglandD.L.,andStarkey,J.R.,1991,Cylometry12:64-67
[9]Dower,W.J.,and Cwirla,S.E.,1992,in“Guide to Electroporation and Electrofrsion ”Chang, D.C.,etal.,editors Academic press,Ssn Dieago p291-301
[10]Swezeg,R.R.,and Epel,D.,1992,同上，p347-361
孫云1,2，蘇明皓2，袁其平1，童崢嶸2，徐寶強(qiáng)2
（1.中民航學(xué)院,天津300300；2.天津理工大學(xué)光電信息與電子工程系,天津300191）
摘要 本文先介紹了細(xì)胞電穿孔的基本原理和天津理工大學(xué)自行研制的 基因脈沖導(dǎo)入儀，重點(diǎn)介紹了細(xì)胞電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、**、酵母上的應(yīng)用及電穿孔技術(shù)的些特殊應(yīng)用?；蛎}沖導(dǎo)入技術(shù)應(yīng)用前景十分廣泛。
關(guān)鍵詞基因脈沖導(dǎo)入，細(xì)胞電穿孔，膜電位
1細(xì)胞電穿孔的基本原理
細(xì)胞電穿孔是種新型生物物理新技術(shù)，它可使細(xì)胞可逆穿孔，從而導(dǎo)入外源RNA、DNA蛋白分子和各種小分子，產(chǎn)生具有新的生物性狀的轉(zhuǎn)化細(xì)胞株。該技術(shù)具有效率、低毒性、普適性和可控性的特點(diǎn)，在細(xì)胞工程和基因工程等方面具有廣泛應(yīng)用。
設(shè)細(xì)胞為球形，懸浮在溶液里并處于電場中。電場誘導(dǎo)的膜電位可由下式表示：
V=1.5αEcosθ
（1）式中α是細(xì)胞的半徑，E是外加電場強(qiáng)度，θ是經(jīng)過細(xì)胞膜任意點(diǎn)的徑向與電場方向之間的夾角。對(duì)于細(xì)胞的兩個(gè)點(diǎn)θ=0°或θ=180°，外加電場誘導(dǎo)的膜電位可進(jìn)步簡化為：Vdp=1.5αE （2）
隨著外加電場強(qiáng)度的增大，在細(xì)胞膜上誘導(dǎo)的膜電位也隨之增大。當(dāng)增大到定程度，細(xì)胞膜將出現(xiàn)電穿孔現(xiàn)象。此時(shí)的誘導(dǎo)膜電位Vcr叫臨界膜電位，Ecr叫做臨界外加電場。般認(rèn)為，外加場強(qiáng)為1～10KV/cm、電脈沖的持續(xù)時(shí)間在1μs～10ms時(shí)細(xì)胞膜會(huì)出現(xiàn)微孔。
公式（1）是細(xì)胞電穿孔的理論基礎(chǔ)，又是實(shí)際應(yīng)用的依據(jù)。但是實(shí)際情況是非常復(fù)雜的。例如，所有細(xì)胞都不是理想的球形，不同細(xì)胞形態(tài)各異、大小不同，就是同種細(xì)胞的大小、形狀也有區(qū)別；不同細(xì)胞膜組分有所不同，不同的培養(yǎng)條件以及細(xì)胞懸浮液成分不同造成生理?xiàng)l件不同等，對(duì)電穿孔都有不同程度的影響。因此公式不能給出準(zhǔn)確值，只能給出參考值，應(yīng)用中的實(shí)際電場強(qiáng)度仍需由實(shí)驗(yàn)來確定。
2導(dǎo)入技術(shù)
2.1導(dǎo)入技術(shù)的介紹
基因脈沖導(dǎo)入儀的主要功能是產(chǎn)生個(gè)電壓、大電流指數(shù)規(guī)律的尖脈沖。其主要組成包括壓脈沖產(chǎn)生器、微機(jī)控制板和電小池。
無論在阻或低阻（例如含鹽或蔗糖緩沖液）情況下都可以正常工作，可用于植物、動(dòng)物和各種微生物的各類細(xì)胞電穿孔，并能得到很的轉(zhuǎn)化率。該儀器用電擊法和傳統(tǒng)法相比簡單易行，省時(shí)間，效率，達(dá)到外同類產(chǎn)品的致效果。
根據(jù)客戶要求在原有產(chǎn)品基礎(chǔ)上我們又做了改進(jìn)，研制出LN-201、301系列產(chǎn)品。LN-301系統(tǒng)框圖如圖2所示。該儀器采用點(diǎn)陣式LCD顯示，能夠同時(shí)顯示多個(gè)信息，可做到漢字、字符同屏，便于用戶的操作和使用。系統(tǒng)可單脈沖和多脈沖兩種功能，便于用戶的選擇使用。組合電容由0.5、1、2、4、8、10μF的6個(gè)電容組合而成，可根據(jù)用戶的需要自由地組合。為了避免壓放電對(duì)單片機(jī)的干擾，采用了數(shù)字地和模擬地各自獨(dú)立的方式，使該儀器的穩(wěn)定性、可靠性得到較大的提。
與此配套的放電小池有1mm、2mm、4mm三種不同規(guī)格的放電小池。其中2mm、4mm小池的電有粘貼型的，1mm、2mm小池電有采用工字鋁注塑型的。
2.2電改進(jìn)
在原有各種電解小池的基礎(chǔ)上，為了更好的滿足客戶在基因**和臨床醫(yī)學(xué)方面的要求，我們又提出針狀電代替放電小池的方案，研制出各種放電電如用于動(dòng)物原地**注入（**增敏）和轉(zhuǎn)基因的針狀電（平行和梅花形）。四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)定強(qiáng)度的瞬態(tài)電磁脈沖作用于細(xì)胞體時(shí)，在細(xì)胞膜上將形成瞬時(shí)微孔，促進(jìn)**等大分子進(jìn)入細(xì)胞液。利用電穿孔結(jié)合******在昆明小鼠上接種和生長的S-180肉瘤，結(jié)果證明，這種方法可以明顯的抑制腫瘤細(xì)胞的生長。中醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形醫(yī)院，用針狀和平板的組合電，實(shí)驗(yàn)進(jìn)展很順利，取得了很好的效果。
3技術(shù)應(yīng)用
3.1電穿孔誘導(dǎo)基因的應(yīng)用
（1）電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在動(dòng)物細(xì)胞上的應(yīng)用利用電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)化動(dòng)物細(xì)胞雜種已成為許多實(shí)驗(yàn)室種有效的常規(guī)手段。電穿孔轉(zhuǎn)化率比傳統(tǒng)方法要數(shù)倍至上千倍。對(duì)貼壁生長的細(xì)胞，可以在單層培養(yǎng)物上進(jìn)行原位基因電轉(zhuǎn)移，不僅操作簡便，且轉(zhuǎn)移效率較[1]。動(dòng)物細(xì)胞電轉(zhuǎn)移不僅廣泛應(yīng)用于各種轉(zhuǎn)化細(xì)胞株，而且為遺傳病的基因**了良好的前景。
（2）電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在植物細(xì)胞上的應(yīng)用
它可以效地把外源DNA或RNA攝取到受體細(xì)胞，建立起轉(zhuǎn)化新株。例如將質(zhì)粒pCMC1020導(dǎo)入大豆原生質(zhì)中，已選擇出轉(zhuǎn)化愈傷組織，并生長出根[2]。
又將pD23和pMP1質(zhì)粒導(dǎo)入玉米原生質(zhì)中經(jīng)選擇培養(yǎng)已獲得轉(zhuǎn)化植株[3][4]。植物電穿孔可以獲得耐寒、耐旱、抗蟲、抗病毒等良品種。
（3）電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在**上的應(yīng)用[5]
**電穿孔基因轉(zhuǎn)移應(yīng)用研究近幾年來有了很大的發(fā)展，目前已有100多種**能成功地進(jìn)行基因電轉(zhuǎn)移。
天津醫(yī)科大學(xué)第附屬醫(yī)院將質(zhì)粒D N A和噬菌體DNA成功地轉(zhuǎn)化或?qū)氪竽c桿菌。該電場單次電壓脈沖范圍1.0 k V/2.5 k V（初電場強(qiáng)度2.8kV/cm～16kV/cm）、電容范圍為5～20μF，用質(zhì)粒p U C 1 8和受體菌株D H 5α，獲得轉(zhuǎn)化率為109～1010/μgDNA。
（4）電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移在酵母上的應(yīng)用
酵母細(xì)胞電穿孔誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移，如能把有關(guān)的目的基因轉(zhuǎn)移到細(xì)胞而得到表達(dá)，并能篩選出所需要的菌株，則對(duì)制藥業(yè)、釀造業(yè)和輕工業(yè)起到巨大推動(dòng)作用。
復(fù)旦大學(xué)生物化學(xué)系成功地進(jìn)行了青島海葵強(qiáng)心多肽在枯草桿菌和畢氏膠木中的分泌表達(dá)研究。
3.2電穿孔技術(shù)的特殊應(yīng)用
（1）電插入法將蛋白分子
插入細(xì)胞膜當(dāng)外加電場大于或等于臨界值時(shí)，在細(xì)胞膜上形成親水的孔洞，貫通于細(xì)胞內(nèi)外。而當(dāng)外加電場稍小于臨界值，但可將外源蛋白質(zhì)插入細(xì)胞質(zhì)膜，而不造成明顯的損傷。這種新穎的方法叫電插入法。例如將CD4受體插入紅細(xì)胞膜上，不僅可以延長受體的循環(huán)生活期，而且了種**艾滋病的方法[6]。
（2）將蛋白分子導(dǎo)入細(xì)胞
在條件下，電穿孔可使細(xì)胞損傷小，而又使細(xì)胞有效地通透，將內(nèi)切酶抗體等導(dǎo)入細(xì)胞。例如將腫瘤天門冬酰胺合成酶的單克隆抗體導(dǎo)入SHU**細(xì)胞和人成纖維細(xì)胞HT-5K，細(xì)胞成活率達(dá)80%～90%，而且90%的活細(xì)胞結(jié)合了抗體[7][8]。
（3）建立基因庫
電穿孔技術(shù)現(xiàn)已公認(rèn)是在原核細(xì)胞中進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移的有效的手段。對(duì)些好的菌株，其轉(zhuǎn)化率達(dá)1010/μgDNA，從而僅用少量DNA即可構(gòu)建綜合的基因庫。Dower等利用電穿孔方法已經(jīng)開發(fā)構(gòu)建大于109個(gè)獨(dú)立重組的質(zhì)粒庫[9]。
（4）在原位研究酶的活性
例如海膽卵在受精過程中，其生理活性增強(qiáng)，而酶是影響新陳代謝的因素，研究酶調(diào)節(jié)機(jī)制是令人感興趣的問題，電穿孔對(duì)細(xì)胞完整的干擾小，可以把帶標(biāo)記的底物導(dǎo)入細(xì)胞，進(jìn)行酶活性的研究[10]。
（5）基因靶定向
在通常情況下，導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的DNA在細(xì)胞內(nèi)基因組由非同源重組整合到非特定位置上。導(dǎo)入的DNA也可以偶然地由同源重組直接整合到特定位置。這種同源重組稱為基因靶定向。基因轉(zhuǎn)移效率越，同源重組體就越多。而電穿孔方法了個(gè)快速、效的將外源DNA導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法，使之能很容易的產(chǎn)生大量的細(xì)胞轉(zhuǎn)化體，成為基因靶定向中誘導(dǎo)DNA進(jìn)入細(xì)胞的個(gè)值得推薦的方法。
參考文獻(xiàn)
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