蛋白純化系統(tǒng)、超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、雙光束核酸蛋白檢測儀、紫外分析儀、紫外檢測儀、恒流泵、自動部分收集器等為**的十幾個產(chǎn)品系列
文章詳情
為什么要從化學(xué)發(fā)光轉(zhuǎn)換到熒光檢測
日期：2024-11-25 05:23
瀏覽次數(shù)：636
摘要：Western blot成像方法取決于二抗的標(biāo)記物，常用的方法有基于酶促反應(yīng)的化學(xué)發(fā)光法，基于熒光染料的可見熒光方法和紅外熒光方法，那么我們應(yīng)該如何選擇呢？
*合適的Western blot實(shí)驗(yàn)方法取決于您期望獲得哪些信息，也就是取決于您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，小編比較了現(xiàn)有方法的優(yōu)缺點(diǎn)，并分享了自己的心得，希望能夠幫助您選擇到*佳的實(shí)驗(yàn)方法。
Western blot成像方法取決于二抗的標(biāo)記物，常用的方法有基于酶促反應(yīng)的化學(xué)發(fā)光法，基于熒光染料的可見熒光方法和紅外熒光方法，那么我們應(yīng)該如何選擇呢？
*合適的Western blot實(shí)驗(yàn)方法取決于您期望獲得哪些信息，也就是取決于您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，小編比較了現(xiàn)有方法的優(yōu)缺點(diǎn)，并分享了自己的心得，希望能夠幫助您選擇到*佳的實(shí)驗(yàn)方法。
化學(xué)發(fā)光方法
化學(xué)發(fā)光western blot是相對容易且靈敏度極高的檢測方法，靈敏度可以達(dá)到fg級。
適用于研究：通過電泳可輕松分離的分子量差異顯著的蛋白。
> 檢測單一蛋白
> 確定蛋白有無
> 檢測抗體反應(yīng)
> 蛋白純度分析
> 檢測低豐度蛋白
*合適的Western blot實(shí)驗(yàn)方法取決于您期望獲得哪些信息，也就是取決于您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，小編比較了現(xiàn)有方法的優(yōu)缺點(diǎn)，并分享了自己的心得，希望能夠幫助您選擇到*佳的實(shí)驗(yàn)方法。
化學(xué)發(fā)光方法
化學(xué)發(fā)光western blot是相對容易且靈敏度極高的檢測方法，靈敏度可以達(dá)到fg級。
適用于研究：通過電泳可輕松分離的分子量差異顯著的蛋白。
> 檢測單一蛋白
> 確定蛋白有無
> 檢測抗體反應(yīng)
> 蛋白純度分析
> 檢測低豐度蛋白
| 優(yōu)勢 | 劣勢 |
| 靈敏度高 | 半定量 |
| 實(shí)驗(yàn)流程熟悉 | 酶促反應(yīng) |
| 兼容膠片和數(shù)字成像系統(tǒng) | 一次只能檢測單一信號 |
| 需要玻璃和重孵育 | |
| 膠片沒有過飽和提醒 |
熒光檢測方法
熒光染料分為可見熒光染料和紅外熒光染料，從而將熒光western blot檢測分為可見熒光檢測和紅外熒光檢測。目前可見熒光檢測*多三個通道，可以同時檢測三種不同的蛋白，近紅外檢測*多為兩個通道，一定選擇激光光源激發(fā)的哦，更接近近紅外染料的*大發(fā)射波長680nm和800nm，增強(qiáng)二抗信號，提高檢測的靈敏度。
熒光Western blot使用熒光染料標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測，膜上的靶標(biāo)蛋白濃度與可見熒光信號強(qiáng)度呈線性關(guān)系，實(shí)現(xiàn)真實(shí)可靠的定量分析。熒光染料發(fā)射光譜不同，因此在一張印跡膜上可實(shí)現(xiàn)多重檢測。在無需剝離和重孵育條件下，進(jìn)行上樣量質(zhì)控，可以分析翻譯后修飾蛋白。
因此當(dāng)您進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)室，選擇熒光檢測方法，妥妥的：
> 同時檢測多種蛋白
> 研究翻譯后修飾蛋白
> 同一印跡膜的上樣質(zhì)控
> **定量western blot實(shí)驗(yàn)
| 優(yōu)勢 | 劣勢 |
| 可進(jìn)行多重檢測 | 膜會有自發(fā)熒光 |
| 定量 | |
| 信號持久穩(wěn)定 | |
| 實(shí)驗(yàn)方法不需改變太多 |
期刊雜志要求：
例如nature中“Image Integrity and Standards”中鼓勵在一張印跡膜上進(jìn)行內(nèi)參和目的蛋白的的檢測，同時使用合理的標(biāo)準(zhǔn)化方法：例如：全蛋白歸一化。
化學(xué)發(fā)光屬于酶促反應(yīng)，動態(tài)范圍窄，只能實(shí)現(xiàn)定性分析，一次只能檢測一個信號，如要檢測多個信號，需要剝離和重孵育，如使用膠片成像，還需要反復(fù)摸索曝光時間，顯影定影設(shè)備和設(shè)備的維護(hù)，熒光檢測可同時滿足期刊雜志發(fā)表要求、一次可進(jìn)行多個信號檢測，反應(yīng)條件一致，jingzhun定量，特別近紅外熒光檢測方法，具有低背景，高信噪比，是現(xiàn)在western blot熒光定量的金標(biāo)準(zhǔn)。