DNA樣品如何收集和準(zhǔn)備進(jìn)行研究

那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于DNA樣品如何收集和準(zhǔn)備進(jìn)行研究：

在對DNA進(jìn)行測序或通過基因工程對其進(jìn)行改變之前，科學(xué)家先對其進(jìn)行分離。這似乎是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)，因?yàn)榧?xì)胞包含多種其他化合物，例如蛋白質(zhì)，脂肪，糖和小分子。幸運(yùn)的是，生物學(xué)家可以利用DNA的化學(xué)特性從這些污染物中分離出DNA，并為進(jìn)一步研究做準(zhǔn)備。此過程稱為DNA提取。

細(xì)胞裂解

有許多不同的技術(shù)用于DNA提取。單個(gè)實(shí)驗(yàn)室所使用的DNA取決于要進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)類型以及DNA的純度?？茖W(xué)家通常從含有細(xì)胞的樣本開始，例如組織或血液樣本，然后將細(xì)胞弄開或裂解。您可以通過多種方式裂解細(xì)胞。添加清潔劑會(huì)使它們散開，并使其經(jīng)受高頻聲波。或者，將樣品與玻璃珠混合并使其快速振動(dòng)，會(huì)物理分裂細(xì)胞并釋放其內(nèi)容物。

快速和骯臟的方法

如果不需要高純度，科學(xué)家可以添加一種稱為蛋白酶K的酶來分解樣品中的大多數(shù)蛋白質(zhì)，然后直接使用。但是，由于大多數(shù)污染物仍然存在，因此該技術(shù)非常骯臟，因此僅在優(yōu)先考慮速度且純度不成問題的情況下才適用。另一種快速而骯臟的方法是通過添加鹽（如銨鹽或乙酸鉀）以迫使蛋白質(zhì)沉淀來提高鹽濃度，從而去除蛋白質(zhì)。由于仍然存在許多其他污染物，因此該技術(shù)也相當(dāng)臟。

苯酚-氯仿萃取

另一種方法是用去污劑溶解細(xì)胞，然后將溶液與異戊醇，氯仿和苯酚混合。然后將溶液分為兩層。蛋白質(zhì)**終保留在上部有機(jī)層中，而DNA保留在下部水層中。此技術(shù)需要仔細(xì)控制鹽濃度和pH才能獲得良好結(jié)果。這很耗時(shí)，而且苯酚和氯仿都是劇毒化學(xué)品。因此，雖然苯酚-氯仿萃取曾經(jīng)是常規(guī)操作，但近年來其他技術(shù)也變得越來越流行。

陰離子交換色譜

與苯酚-氯仿萃取相比，陰離子交換色譜法具有更高的純度和更一致的結(jié)果。管或柱中裝有小顆粒，這些小顆粒上帶有帶正電荷的位點(diǎn)，帶負(fù)電荷的分子或陰離子可以與之結(jié)合。DNA與這些陰離子交換位點(diǎn)結(jié)合，而其他污染物（如蛋白質(zhì)和RNA）則從色譜柱上洗掉。之后，使用富含鹽的溶液將DNA從色譜柱中拉出。

套件

純化DNA，也許可靠的技術(shù)是使用特制試劑盒。這些套件在試管中包含硅膠膜。DNA會(huì)粘附在膜上，同時(shí)使用試劑盒隨附的一系列專門準(zhǔn)備的鹽溶液將其他污染物洗掉。**后，用低鹽溶液從柱子上洗掉DNA。這些試劑盒快速，易于使用，并提供可重復(fù)的結(jié)果。

吸光度

一旦分離出DNA并將其重新懸浮在pH控制的緩沖溶液中，之后一步就是測試其純度。一種簡單方便的方法是檢查它在260和280納米波長處吸收了多少紫外線。如果DNA是純凈的，則260納米的吸光度除以280納米的吸光度應(yīng)等于1.8。通過測量260納米的吸光度，您還可以確定DNA的濃度。

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