文章詳情

熒光顯微鏡原理應(yīng)用及使用

日期：2024-11-23 10:30

瀏覽次數(shù)：1573

摘要：

()熒光顯微鏡的原理和結(jié)構(gòu)特點：熒光顯微鏡是利用個發(fā)光效率的點光源，經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出定波長的光(如紫外光3650入或紫藍光4200入)作為激發(fā)光、激發(fā)標本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察。這樣在強烈的對襯背景下，即使熒光很微弱也易辨認，敏感性，主要用于細胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究。熒光顯微鏡的基本構(gòu)造是由普通光學(xué)顯微鏡加上些附件(如熒光光源、激發(fā)濾片、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎(chǔ)上組成的。熒光光源——般采用超壓汞燈(50200W)，它可發(fā)出各種波長的光，但每種熒光物質(zhì)都有個產(chǎn)生強熒光的激發(fā)光波長，所以需加用激發(fā)濾片（般有紫外、紫色、藍色和綠色激發(fā)濾片），僅使定波長的激發(fā)光透過照射到標本上，而將其他光都吸收掉。每種物質(zhì)被激發(fā)光照射后，在短時間內(nèi)發(fā)射出較照射波長更長的可見熒光。熒光具有專性，般都比激發(fā)光弱，為能觀察到專的熒光，在物鏡后面需加阻斷(或壓制)濾光片。它的作用有：是吸收和阻擋激發(fā)光進入目鏡、以免于擾熒光和損傷眼睛，是選擇并讓特異的熒光透過，表現(xiàn)出專的熒光色彩。兩種濾光片必須選擇配合使用。

熒光顯微鏡就其光路來分有兩種：

1．透射式熒光顯微鏡: 激發(fā)光源是通過聚光鏡穿過標本材料來激發(fā)熒光的。常用暗視野集光器，也可用普通集光器，調(diào)節(jié)反光鏡使激發(fā)光轉(zhuǎn)射和旁射到標本上．這是比較舊式的熒光顯微鏡。其點是低倍鏡時熒光強，而缺點是隨放大倍數(shù)增加其熒光減弱．所以對觀察較大的標本材料較好。

2．落射式熒光顯微鏡這是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡，與上不同處是激發(fā)光從物鏡向下落射到標本表面，即用同物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上個雙色束分離器，它與光鈾呈45。角，激發(fā)光被反射到物鏡中，并聚集在樣品上，樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進入物鏡，反回到雙色束分離器，使激發(fā)光和熒光分開，殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片／雙色束分離器／阻斷濾片的組合插塊，可滿足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需要。此種熒光顯微鏡的點是視野照明均勻，成像清晰，放大倍數(shù)愈大熒光愈強。

（）熒光顯微鏡使用方法。

1．打開燈源，超壓汞燈要預(yù)熱幾分鐘才能達到亮點。

2．透射式熒光顯微鏡需在燈源與聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片，在物鏡的后面裝上相應(yīng)的阻斷濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片／雙色束分離器／阻斷濾片的插塊。

3．用低倍鏡觀察，根據(jù)不同型號熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)裝置，調(diào)整光源中心，使其位于整個照明光斑的中央。

4．放置標本片，調(diào)焦后即可觀察。使用中應(yīng)注意：末裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷；用油鏡觀察標本時，必須用無熒光的特殊油鏡；壓汞燈關(guān)閉后不能立即重新打開，需經(jīng)5分鐘后才能再啟動，否則會不穩(wěn)定，影響汞燈壽命。

(三)觀察在示教臺上的熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片，可見經(jīng)o．01％的丫啶橙熒光染料染色的細胞，細胞核和細胞質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。

上海金鵬分析儀器有限公司 www.jp1718.com
電話：021-36162366 60959971 61425398
手機： 13764356938 18918199710 13585698333
QQ:842727501，964122960，765695826， 2460311703， 2431022418，170324176
傳真：021-36162369
地址：上海市真陳路1398弄15號郵編：200444

下一篇：恒溫恒濕試驗箱的保養(yǎng)方法
上一篇：光澤度儀的分類及應(yīng)用